根据其他植物PAL基因的DNA序列的保守区域,设计了一对简并引物,经PCR扩增,得到一条862 bp的特异性扩增带。将PCR扩增产物构建到T-载体并测序,获得了862 bp DNA序列。通过分析所得的862 bp DNA序列及其编码的氨基酸序列,与其他植物PAL基因的DNA序列和蛋白质序列分别进行比较,证实了所得序列为银杏PAL基因的部分序列。Gbpal1已经被Genebank收录,序列号为AY578145。Southern杂交结果表明银杏PAL是一个多基因家族。

根据其它植物PAL基因的保守区域,设计一对兼并引物,采用RT-PCR方法从国槐中克隆了一个长866 bp的PAL基因片段,命名为SjPAL。序列分析发现SjPAL 多肽与其它植物的PAL 氨基酸序列高度同源(87%以上) ,且包含与水稻和拟南芥的PAL类似的活性位点。系统进化树分析表明SjPAL 与豆科植物的PAL 亲缘关系较近。RTP-CR结果显示, SjPAL 在根和茎的表达量约为叶中的3倍。利用反义RNA技术将SjPAL 基因克隆至植物表达载体pB I121,构建了SjPAL反义RNA植物表达载体pB I121-PAL ,通过根癌农杆菌EHA105将其导入拟南芥基因组,对获得的抗性植株进行PCR鉴定、Northern杂交分析、PAL 活性分析以及总多酚含量和类黄酮含量分析。结果表明,该反义RNA已整合到拟南芥基因组中,转基因拟南芥的PAL 基因表达量、单位材料PAL 活性、总多酚含量和类黄酮含量均显著低于野生型对照。本研究为下一步利用该基因反义表达载体转化国槐,通过调节酚类物质含量提高其在再生体系中的生根能力提供了试验依据。

利用RACE技术从银杏中克隆到过氧化氢酶基因(GbCAT1)的cDNA全长。进化树分析结果表明:GbCAT1和其他物种的CAT源自于相同的祖先。Southern 杂交显示:GbCAT1属于1个小的多基因家族。实时定量RT-PCR分析表明:GbCAT1在银杏的根、茎、叶和果中都有表达,在叶中的相对表达量最高,其次为果、茎和根。GbCAT1的转录受到ABA、渗透压、紫外、低温和高温胁迫的诱导。水杨酸处理下,GbCAT1相对表达量迅速降低。CAT1基因在逆境条件下的相对表达变化与环境胁迫有关。